2-[[2-Etoxi-4-(4-hidroxi-1-piperidinil) fenil]amino]-5,11-dihidro-5,11-dimetil-6H-pirimido[4,5-b][1,4]benzodiazepina-6-

Descrição do produto:

Nome do produto: 2-[[2-Ethoxy-4-(4-hidroxi-1-piperidinil) fenil]amino]-5,11-dihidro-5,11-dimetil-6H-pirimido[4,5-b][1,4]benzodiazepina-6-one CAS NO:1234480-50-2

Sinônimos:

XMD 8-92 (base livre);

6H-pirimido[4,5-b][1,4]benzodiazepina-6-um,2-[[2-etoxi-4-(4-hidroxi-1-piperidinil)fenil]amino]-5,11-dihidro-5,11-dimetil-;

Propriedades químicas e físicas:

Aparência: pó branco a quase branco

Análise: ≥ 98,0%

Densidade:10,3 g/cm3

Ponto de ebulição:7410,8°C a 760 mmHg

Ponto de inflamação:4020,4°C

Em Vitro

O XMD8-92 apresenta a maior afinidade para com o BMK1 com uma constante de dissociação medida (Kd) de 80 nM, enquanto o DCAMKL2, TNK1 e PLK4 apresentam Kd?? de 190, 890 e 600 nM, respectivamente.O XMD8-92 é perfilado em relação a todas as quinases detectáveis nos lisatos de células HeLa utilizando o método KiNativ e encontra- se cerca de 10 vezes mais selectivo para o BMK1 com uma IC50 de 1..5 μM do que os mais potentes fora-alvo, TNK1 (IC50=10 μM) e ACK1 (também conhecido como TNK2, IC50=18 μM). Outros fracos fora-alvo incluem o domínio de quinase 2 de RSK1 e RSK2, PIK4A e PIK4B e FAK.O MEK5 não é significativamente inibido pelo XMD8-92 até 50 μM [1]O XMD8-92 mostra uma elevada seletividade para a BMK1 num ensaio de ligação competitiva in vitro ao local do ATP contra 402 quinases, bem como no método KiNativ contra todas as quinases detectáveis nos lisatos de células HeLa.O XMD8-92 bloqueia a ativação da BMK1 induzida pelo EGF com IC50 de 240 nM e, com concentrações de até 5 μM, o XMD8-92 não tem efeito inibitório na activação da ERK1/2 pelo EGF[2].

Em Vivo

O XMD8-92 inibe significativamente o crescimento tumoral in vivo em 95%. A farmacocinética do XMD8-92 é avaliada em ratos Sprague-Dawley, com uma única dose intravenosa ou oral.0 horas de meia- vida de 26 mL/min/kgO XMD8-92 tem uma distribuição tissular moderada com um volume de distribuição calculado de 3, 4 L/ kg. O XMD8-92 tem uma elevada biodisponibilidade oral com 69% da dose absorvida.Após uma dose oral única de 2 mg/kg, concentrações plasmáticas máximas de aproximadamente 500 nM são observadas após 30 minutos, com 34 nM restantes 8 horas após a dose.As concentrações plasmáticas elevadas do medicamento (aproximadamente 10 μM após uma dose IP de 50 mg/ kg) são mantidas ao longo dos 14 dias.. O XMD8-92 parece ser bem tolerado e os ratos pareciam saudáveis sem sinais de sofrimento. Nenhuma instabilidade vascular foi observada nos ratos tratados com XMD8-92.O tratamento com XMD8-92 em ratos imunocompetentes e imunodeficientes bloqueou o crescimento dos tumores do xenótransplante pulmonar e cervical., respectivamente, em 95%. This remarkable anti-tumor effect of XMD8-92 in lung and cervical xenograft tumor models is due to XMD8-92’s capacity to inhibit tumor cell proliferation through the PML suppression-inducted p21 checkpoint proteinAlém disso, a eliminação do BMK1 (KO) em ratos leva à remoção completa e irreversível da proteína BMK1,Enquanto o tratamento com XMD8-92 em ratos apenas suprime a actividade da BMK1, o tratamento com XMD8-92 em ratos só suprime a actividade da BMK1 em ratos.Em segundo lugar, a instabilidade vascular observada em ratos KO BMK1 pode ser devida à falta do domínio não-cinase C-terminal da BMK1,que ainda está presente durante o tratamento de animais com XMD8-92 [2].

Análise da cinase

O perfil KiNativ do XMD8-92 é realizado com ATP e ADP acilfosfato- destiobiotina com as seguintes modificações.Os lisatos de células HeLa (5 mg/ml de proteína total) são incubados na presença de XMD8-92 a 50 μM., 10 μM, 2 μM, 0,8 μM e 0 μM durante 15 minutos antes da adição da sonda de acilfosfato de ATP ou ADP (5 μM de concentração final da sonda).As reações da sonda prosseguiram durante 10 minutos e a reação foi interrompida pela adição de ureia e processada para análise da EM.. Samples are analyzed by LC-MS/MS on a linear ion trap mass spectrometer using a time segmented “target list” designed to collect MS/MS spectra from all kinase peptide-probe conjugates that can be detected in HeLa cell lysatesEsta lista de alvos é gerada e validada por uma análise exaustiva prévia dos lisatos de HeLa.Até quatro íons de fragmentos característicos para cada conjugado de peptídeo-sonda de quinase são usados para extrair sinais para cada quinase, e uma comparação de inibidores tratados com lisatos de controlo (não tratados) permitem determinar com precisão a percentagem de inibição em cada ponto.Um manuscrito descrevendo os detalhes desta abordagem de espectrometria de massa direcionada está em preparação.[1].

Admin de animais

Ratos[1] 5×105 Células HeLa são re-suspensadas em DMEM e injetadas subcutaneamente no flanco direito de ratos Nod/Scid de 6 semanas de idade (dia 0).Os ratos foram randomizados em 2 grupos (6 animais).O grupo XMD8-92 (1-28 dias) é tratado com XMD8-92 na dose de 50 mg/ kg duas vezes ao dia por via intraperitoneal.O grupo de controlo recebe injecções diárias da solução transportadora como controlo.No dia 7, o grupo de controlo é randomizado em 2 grupos (6 animais, XMD8-92, dia 7-28, e 12 animais, controlo).O restante grupo de controlo é randomizado em 2 grupos (6 animais).O tratamento com XMD8-92 nos grupos XMD8-92 (7-28 dias) e XMD8-92 (14-28 dias) é iniciado no dia 7 e no dia 14, respectivamente.O tamanho do tumor é medido com uma pinça, e o volume do tumor é determinado[1].

Referências:

[1] Yang Q, et al. A inibição farmacológica da BMK1 suprime o crescimento do tumor através da proteína promyelocítica da leucemia.Célula de câncer. 2010 Sep 14;18(3):258-67.

Yang Q, et al. Dirigindo-se à via BMK1 MAP quinase na terapia do câncer. Clin Cancer Res. 2011 Jun 1;17(11):3527-32.

A quinase ALK estimula a quinase ERK5 para promover a expressão do oncogênio MYCN no neuroblastoma. Sci Signal. 2014 Oct 28;7 ((349):ra102.

Se você estiver interessado em nossos produtos ou tiver alguma pergunta, sinta-se à vontade para entrar em contato conosco!

Os produtos patenteados são oferecidos apenas para fins de I & D. No entanto, a responsabilidade final cabe exclusivamente ao comprador.